2023-09-18
摘要
本品为Tau、Glu、Gly、Val、Cysteine等5种氨基酸配制而成的透明胶质类物质，使用Biochrom30+全自动氨基酸分析仪，对其所含的游离氨基酸组分及含量进行分析，并了解对该样品高温灭菌前后，所含氨基酸的具体影响。结果表明该未知样中氨基酸各单个氨基酸含量的浓度，及高温灭菌前后的分别见附页结果表。
一、样品前处理
1、所用试剂
1.1 Loading Buffer：锂盐系统，pH 2.2
1.2 磺基水杨酸溶液：取50g磺基水杨酸溶于1L纯水中
1.3 乙二胺四乙酸二钠溶液：取10g EDTA-Na溶于1L纯水中
1.4 0.06mol/L 盐酸：取50mL 盐酸加水稀释至10mL,混匀
1.5 5种氨基酸标准品、Cystine单标
2、前处理设备
1) 分析天平:精度为 0.0001g
2) 移液枪及枪头
3) 0.22um滤膜
4) 一次性注射器
5) 低范围pH试纸
3、样品制备（参考NY/T 1975-2010）
因样品为透明胶质类物质，且可能含有未知大分子等杂质，故需(参考NY/T 1975)进行除蛋白前处理：
吸取2 mL样品于10 mL离心管或试管中,准确加人2 mL磺基水杨酸溶液(1.2)，混匀,放置1h。准确加入1 mL EDTA-Na溶液(1.3)和1 mL盐酸溶液(1.4),混匀,离心15 min(或用0.45um的微孔滤膜过滤)。吸取上清液(或滤液)1 mL(测定当前pH，若有需要则可加少许的Loading Buffer (1.1),使氨基酸浓度处于仪器检测范围内)，移液枪取上述溶液1mL至一次性注射剂，过滤膜，上机待测。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析仪分析方法参数：
1) 色谱柱：Biochrom Li型阳离子交换树脂柱，4.6*20cm
2) 分离程序：
3) 运行时间：经分析时间+再生时间 168.15min
4) 反应单元温度：135°C。
5) 检测波长：570nm、440nm同时检测。
三、样品中氨基酸含量的计算
样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算:
Ci = Cs/As × Ai× F ················· (1)式中:
Ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
F ———样品稀释倍数。
附：透明胶质类物质中，高温灭菌前后比较的游离氨基酸，分析图谱及做样结果：
由结果可知：高温灭菌之后的游离氨基酸含量，相较于灭菌前会有少许提升。这是由于灭菌前的样品中可能含有的少许干扰物质或杂菌，存在经过高温灭菌等的处理会被破坏，释放少许的氨基酸的可能，属合理正常现象。
图1. 样品A--灭菌前—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine
图2. 样品B--灭菌后—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine
Delivering Growth – in Asia and Beyond.
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