2022-08-08
摘要：
本次实验数据均来自Biochrom氨基酸分析仪的国内某行业龙头客户，基于行业工艺、数据安全性等商业机密原因，不便透露不限于谱图、敏感数据等过多信息，还望见谅。
本次测试样品为奶粉，使用Biochrom 30+ 全自动氨基酸分析仪，对我们所关注的样品中乳清蛋白所占总蛋白含量的比重进行分析，默认所有蛋白含量=所测定氨基酸之和的含量，并据此作为其所含乳清蛋白的测定依据。结果表明该奶粉样品中乳清蛋白约占奶粉蛋白的73%，详细数据及结果见附件。
一、样品前处理
1、所用试剂
1.1 Loading Buffer(上样液)：钠盐系统，pH 2.2
1.2 过甲酸溶液：30%双氧水+88%甲酸按(V:V=1:9)混合，于室温放置1h，再放到冰水中冷却0.5h，制备完尽快使用
1.3 偏重亚硫酸钠：33.6g/100mL
1.4 盐酸：6.0mol/L
1.5 氨基酸标准品
2、前处理设备
1) 分析天平:精度为 0.0001g
2) 移液枪及枪头
3) 容量瓶及胶头滴管
4) 0.22μm滤膜
5) 一次性注射器
6) 低范围pH试纸
7) 离心机
3、样品制备（参考标准：AOAC 994.12-1997；ISO 13904）
样品为奶粉，而我们所关注的是其中的乳清蛋白所占总蛋白含量的比重，为了便于测试，我们默认将所有测定的氨基酸之和作为所测蛋白的含量，故为了准确测定样品中所含所有氨基酸，前处理做如下处理：
3.1 乳清蛋白的提取
3.2 酸水解前处理
3.3 氧化水解前处理
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析仪分析方法参数：
1. 色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm
2. 分离程序：
1. 运行时间：分析时间+再生时间共88.39min
2. 反应单元温度：135°C
3. 检测波长：570nm、440nm同时检测
三、计算
样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算:
Ci = Cs/As × Ai× F……………………(1)式中:
Ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
F ———样品稀释倍数。
附分析结果表：
因为酸水解前处理会破坏胱氨酸、蛋氨酸，色氨酸无法测出；氧化水解会破坏酪氨酸、组氨酸。所以为了确保实验的准确性，分别对样品进行酸水解和氧化水解，最终分别将两种方法测得的氨基酸含量之和作为相对应的蛋白质含量，即乳清蛋白/奶粉蛋白=Ox(Hyd)乳清蛋白AA/Ox(Hyd)奶粉蛋白AA。
结果表
Delivering Growth – in Asia and Beyond.
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