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通过EV研究揭示甲肝病毒的作用机制

2022-07-04

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甲肝病毒(HAV)是一种经典的非包膜病毒,却主要以准包膜的形式(eHAV)作用于宿主细胞,并且在eHAV的衣壳表面还有一种病毒蛋白pX。为了探究病毒蛋白pX在甲肝病毒作用于宿主细胞过程中的功能,研究人员建立一种简化模型,将病毒蛋白pX融合表达到eGFP的C端,获得eGFPpX。免疫共沉淀(co-IP)实验已经证实病毒蛋白pX与凋亡相关蛋白ALIX之间存在相互作用关系。研究人员借助ZetaView,先在散射光模式下,检测人肝癌细胞Huh7-eGFP和Huh7-eGFPpX来源的2种EVs,发现2种EVs的粒径分布曲线基本一致(如下图右),peak在100nm附近,这说明病毒蛋白pX融合与否,并未影响EV的产生;然后研究人员在荧光模式下继续检测2种不同来源的EVs,结果发现荧光模式下仅能检测到Huh7-eGFPpX来源的EV,检测不到Huh7-eGFP来源的EV,这说明病毒蛋白pX直接决定了eGFPpX与ALIX的结合。随后研究人员又通过截短、敲除等方式,进一步发现pX蛋白C端部分和ALIX的改变都会直接导致两者无法结合。研究人员通过这一系列严谨的实验设计,证明了病毒蛋白pX在甲肝病毒(HAV)作用于宿主细胞时起到了必不可少的作用,同时也展示了ZetaView如何在用户巧妙的实验设计下帮助用户挖掘重要的数据信息。

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Wang Jiang, Pengjuan Ma, Libin Deng, Zhi Liu, Xu Wang, Xiyu Liu & Gang Long (2020) Hepatitis A virus structural protein pX interacts with ALIX and promotes the secretion of virions and foreign proteins through exosome-like vesicles, Journal of Extracellular Vesicles, 9:1,1716513

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