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明暗阈值在蛋白质聚集体成像分析中的重要性

2019-04-08

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目的:动态成像粒子分析(DIPA)是一种较新的技术,已被证明可以更好地表征基于蛋白质的药物中的亚可见颗粒,而不是使用光阻法等传统技术。 这是因为在这些配方中发现的大多数亚可见颗粒实际上是蛋白质聚集体,它们是无定形的半透明颗粒,其可能被错误表征或甚至不被光阻法系统看到。 DIPA系统能够通过调整光强度阈值从背景中分割非常透明的粒子,创建用于所有粒子测量的二值图像,因此阈值技术的选择对于测量的有效性是至关重要的。 本文将表明,改变阈值方法可以极大地改变粒度分布,并包括对所用方法的建议。

方法:通过DIPA仪器检测蛋白质药物样品,保存相机捕捉的实际“原始图像”(每帧收集的全摄像机视野的灰度图像)。 然后处理这些原始图像,好比它们是DIPA软件的“实时数据”,每次运行数据都使用不同的阈值调节技术。通过对每个阈值处理使用相同的图像集,我们确保结果的任何变化只能由阈值处理过程引起。 然后将每次运行绘制成对数频率与等效球形直径(ESD,常见的粒度测量)的直方图。 当在相同的直方图上绘制不同的运行时,对于每种不同的阈值技术,可以看到结果的明显差异。


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